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      2. 氨基酸分析儀檢測透明膠質(zhì)類中的蛋白水氨基酸

        2023-09-27

        摘要:

        本品為未知含量及種類的氨基酸配制而成的透明膠質(zhì)類物質(zhì),使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸分析儀,對(duì)其所含的游離氨基酸組分及含量進(jìn)行分析。結(jié)果表明該未知樣中氨基酸各單個(gè)氨基酸含量的濃度見附頁結(jié)果表。其中樣AE01氨基酸總含量為31.969 umol/mL,AE03氨基酸總含量為36.790 umol/mL。



        一、樣品前處理

        1、所用試劑

        1.1 Loading Buffer:鈉鹽系統(tǒng),pH 2.2

        1.2 濃鹽酸,濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純

        1.3 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻

        1.4 水:去離子水

        1.5 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品




        圖片

        2、前處理設(shè)備

        1) 分析天平:精度為 0.0001g

        2) 移液槍及槍頭

        3) 一次性注射器及0.22um濾膜

        4) 低范圍pH試紙

        5) 真空干燥烘箱

        6) 無油真空泵

        7) 電熱平板及稱量瓶


        3、樣品制備(參考shipinzhongAAS的測定)

        移液槍準(zhǔn)確移取試樣1mL,加入水解管中,加入10mL 6mol/L鹽酸(1.3),冷凍3min?5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮?dú)?重復(fù)抽真空-充入氮?dú)獠襟E3次后,在充氮?dú)鉅顟B(tài)下擰緊螺蓋。將水解管放入真空干燥箱中,110°C水解22-24h,冷卻、混勻、開管、轉(zhuǎn)移并定容到50ml容量瓶中,用移液槍取適量水解液于稱量瓶中,在電熱平板上60℃濃縮至干,必要時(shí)加入少許水(1.4),重復(fù)蒸干1-2次,加入適量PH2.2的稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液溶解(1.1),振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22 μm 濾膜后,轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用。


        二、分析方法描述(Biochrom 30+)

        氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

        1) 色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6′20cm

        2) 分離程序:

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        運(yùn)行時(shí)間:經(jīng)分析時(shí)間+再生時(shí)間 59.35min

        3) 反應(yīng)單元溫度:135°C

        4) 檢測波長:570nm、440nm同時(shí)檢測


        三、樣品中氨基酸含量的計(jì)算

        樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計(jì)算:

        Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式中:

        Ci ——樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

        Cs ——氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

        Ai ——試樣測定液氨基酸i的峰面積;

        As ——氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;

        F ——樣品稀釋倍數(shù)。


        附、透明膠質(zhì)類中的蛋白水解氨基酸其分析圖譜及做樣結(jié)果:

        圖1.  樣品AE01

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        圖2.  樣品AE03

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        大昌華嘉是一家專注于亞洲地區(qū),在市場拓展服務(wù)領(lǐng)域處于領(lǐng)先地位的集團(tuán)。大昌華嘉致力于幫助其他公司和品牌拓展在消費(fèi)品、醫(yī)藥保健、特色原料、科技事業(yè)領(lǐng)域的業(yè)務(wù)。大昌華嘉的服務(wù)范圍包括采購、市場研究與分析、市場營銷與銷售、配送與物流以及售后服務(wù)。公司在瑞士證券交易所上市,在全球35個(gè)市場營運(yùn),擁有33,000名專業(yè)員工, 2018年銷售凈額為113億瑞士法郎。大昌華嘉于1865年成立,憑借深厚的瑞士傳統(tǒng)背景,公司在亞洲開展業(yè)務(wù)歷史悠久, 深深植根于亞太地區(qū)的社會(huì)和企業(yè)界。大昌華嘉科技事業(yè)部專注于為特定的行業(yè)應(yīng)用領(lǐng)域提供全面的解決方案。2018年該業(yè)務(wù)單元擁有1,220名員工,凈銷售額為4.121億瑞士法郎。 

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